染色體原位雜交-貝科新肽(推薦商家)

詢盤留言 |投訴|申領(lǐng)|刪除 產(chǎn)品編號(hào)：580908025 更新時(shí)間：2024-06-29

武漢貝科新肽科技有限公司

主營業(yè)務(wù)：原位雜交,亞細(xì)胞定位,蛋白互作,啟動(dòng)子篩選
公司官網(wǎng)：bkxtbio.com.cn
公司地址：湖北省武漢市洪山區(qū)關(guān)山大道289號(hào)紫菘逸景華庭二期109棟2層2002-3號(hào)

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菌落的裂解及DNA結(jié)合于纖維素濾膜

（1）在一張保鮮膜上制作一個(gè)裝有0.5mol/L NaOH的小洼（0.75ml），使菌落面朝上，將濾膜放到小洼上，展平保鮮膜，染色體原位雜交，使濾膜均勻濕潤，讓濾膜留于原處2-3分鐘。

（2）用干紙巾從濾膜的下方吸干濾膜，用一張新的保鮮膜和新配制的0.5mol/L NaOH重復(fù)步驟（1）。

（3）吸干濾膜，將濾膜轉(zhuǎn)移到新的帶有1mol/L Tris·Cl(pH7.4）的保鮮膜洼上。5分鐘后吸干濾膜，再重復(fù)一次該步驟。

（4）吸干濾膜，把它轉(zhuǎn)移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4）的保鮮膜小洼上5分鐘后吸干濾膜，轉(zhuǎn)移到一張干的濾紙上，置于室溫20-30分鐘，使濾膜干燥。

（5）將濾膜夾在兩張干的濾紙之間，在真空烤箱中于80℃干烤2小時(shí)，固定DNA。

（6）將固定在膜上的DNA與32 P標(biāo)記的RNA進(jìn)行雜交。

原位雜交技術(shù)是在一定的溫度和離子濃度下，使具有特異序列的單鏈探針通過堿基互補(bǔ)規(guī)則與組織細(xì)胞內(nèi)待測(cè)的核酸復(fù)性結(jié)合而使得組織細(xì)胞中的特異性核酸得到定位，并通過探針上所標(biāo)記的檢測(cè)系統(tǒng)將其在核酸的原有位置上顯示出來。經(jīng)特定標(biāo)記的核苷酸鏈為探針，可與組織切片、細(xì)胞或染色體標(biāo)本中的待檢DNA片段或mRNA進(jìn)行雜交，然后顯示標(biāo)記物，從而分析待檢核酸的分布和含量。利用此項(xiàng)技術(shù)可研究各種基因在染色體上的定位，編碼某種蛋白質(zhì)的mRNA在胞質(zhì)中的表達(dá)。

把濾膜放在紙巾上于室溫晾干后，把濾膜（編號(hào)面朝上）放在一張保鮮膜上，并在保鮮膜上作幾個(gè)不對(duì)稱的標(biāo)記，以使濾膜與性自顯影片位置對(duì)應(yīng)。

用第二張保鮮膜蓋住濾膜。加光片并加上增感屏于-70℃曝光12-16小時(shí)。

底片顯影后，在底片上貼一張透明硬紙片。在紙上標(biāo)記陽性雜交信號(hào)的位置，同時(shí)在不對(duì)稱分布點(diǎn)的位置上作出標(biāo)記?？蓮牡灼先∠峦该骷垼ㄟ^對(duì)比紙上的點(diǎn)與瓊脂上的點(diǎn)來鑒定陽性菌落。

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