熒光原位雜交(FISH)技術(shù)具有以下優(yōu)點:
高特異性:熒光探針的合成是定向的,原位雜交,保證了雜交過程的特異性,可以有效地降低非特異性雜交和背景干擾。
高靈敏度:熒光信號的檢測比性信號的檢測更靈敏,可以檢測出低拷貝數(shù)的DNA序列,甚至可以檢測單個基因序列。
快速簡便:FISH技術(shù)操作簡便,雜交過程可以在數(shù)小時或數(shù)天內(nèi)完成,而且不需要過于復(fù)雜的設(shè)備,動物組織原位雜交,便于在實驗室開展。
FISH是原位雜交技術(shù)大家族中的一員,因其所用探針被熒光物質(zhì)標記(間接或直接)而得名,該方法在80年代末 被發(fā)明,現(xiàn)已從實驗室逐步進入臨床診斷領(lǐng)域?;驹硎菬晒鈽擞浀暮怂崽结樤谧冃院笈c已變性的靶核酸在退火 溫度下復(fù)性;通過熒光顯微鏡觀察熒光信號可在不改變被分析對象(即維持其原位)的前提下對靶核酸進行分析。DNA熒光標記探針是其中常用的一類核酸探針。利用此探針可對組織、細胞或染色體中的DNA進行染色體及基因水平 的分析。熒光標記探針不對環(huán)境構(gòu)成污染,靈敏度能得到保障,可進行多色觀察分析,因而可同時使用多個探針,縮 短因單個探針分開使用導(dǎo)致的周期過程和技術(shù)障礙。植物原位雜交除了在遺傳育種方面的應(yīng)用,還在其他領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用,包括:
植物基因研究:植物基因是一種利用基因工程技術(shù)來人類遺傳疾病的方法。通過植物原位雜交技術(shù),植物染色體原位雜交,可以將人類基因?qū)氲街参锛毎?,植物組織原位雜交,并在植物細胞中表達出相應(yīng)的蛋白質(zhì),為基因提供重要的物質(zhì)基礎(chǔ)。
植物抗性研究:植物原位雜交技術(shù)可以用于研究植物對環(huán)境脅迫的抗性機制,例如抗旱、抗鹽、抗病等,有助于了解植物在環(huán)境脅迫下的生理和分子響應(yīng)機制。
植物比較研究:通過植物原位雜交技術(shù)可以比較不同植物之間基因表達模式的差異,從而為植物分類和進化研究提供重要的參考依據(jù)。
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