原位雜交的基本原理是利用標記的核酸探針與細胞或組織中的DNA或RNA進行雜交,植物組織原位雜交,然后通過檢測標記來識別探針的位置。這使得研究人員能夠在細胞或組織中確定特定基因或基因組區(qū)域的位置和表達水平。
原位雜交可以用于多種類型的實驗。例如,它可以用來檢測特定基因在發(fā)育過程中的表達模式,或者確定特定基因變異在細胞中的分布。此外,原位雜交還可以用于診斷疾病,例如某些類型的,以及監(jiān)測效果。
生物領(lǐng)域應(yīng)用原位雜交技術(shù)的例子:
基因表達和調(diào)控研究:原位雜交技術(shù)可以用于研究基因表達的調(diào)控機制。例如,可以標記特定基因的探針,原位雜交,檢測該基因在不同環(huán)境、不同生長條件下的表達情況,進而研究其表達調(diào)控機制。
細胞分化與發(fā)育研究:在細胞分化與發(fā)育研究中,原位雜交技術(shù)常被用于檢測和定位特定基因的表達情況,進而了解細胞分化的過程和機制。例如,可以標記與細胞分化相關(guān)的基因探針,檢測該基因在不同組織、不同發(fā)育階段的表達情況。
原位雜交第三天
1) 用1ml含10%熱滅清的MABT溶液置換溶液,放置搖床上25分鐘,ISH,然后用1mlMABT置換,25分鐘,再用1mlMABT溶液置換,一小時以上,后用1mlMABT溶液置換,25分鐘。
2) 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次,每次放置五分鐘。
3)將胚胎轉(zhuǎn)入十六孔板中,吸去staining buffer,加上300ul BM Purple AP Substrate(底物,用之前加5mM左旋米唑),十六孔板外面包上錫箔紙以避光,動物組織原位雜交,避免搖動,室溫下顯色。
4)每隔一小時觀察胚胎是否開始顯色
5)將顯色完全的胚胎中的底物吸出,用PBST洗兩三次后加上4%多聚甲醛固定,拍照。
6)4C冰箱保存。
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