原位雜交技術(shù)的技術(shù)流程
原位雜交技術(shù)的技術(shù)流程包括樣本處理、探針制備、雜交反應(yīng)和信號(hào)檢測(cè)等步驟。樣本處理包括組織或細(xì)胞的固定、包埋、切片和脫氧核糖核酸酶消化等步驟,目的是保持組織或細(xì)胞的原始結(jié)構(gòu)和核酸序列的完整性。探針制備包括標(biāo)記探針、純化和變性等步驟,目的是提高探針的特異性和敏感性。雜交反應(yīng)包括預(yù)雜交、雜交和洗脫等步驟,目的是使探針與目標(biāo)核酸序列形成雙鏈復(fù)合物。信號(hào)檢測(cè)包括顯色反應(yīng)、熒光染色和性同位素標(biāo)記等步驟,目的是可視化目標(biāo)核酸序列的分布。
熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization,F(xiàn)ISH)是在20世紀(jì)80年代末在性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種非性分子細(xì)胞遺傳技術(shù),以熒光標(biāo)記取代同位素標(biāo)記而形成的一種新的原位雜交方法,探針首先與某種介導(dǎo)分子(reporter molecule)結(jié)合,雜交后再通過(guò)細(xì)胞化學(xué)過(guò)程連接上熒光染料.FISH的基本原理是將DNA(或RNA)探針用特殊的核苷酸分子標(biāo)記,染色體原位雜交,然后將探針直接雜交到染色體或DNA纖維切片上,再用與熒光素分子偶聯(lián)的單與探針?lè)肿犹禺愋越Y(jié)合來(lái)檢測(cè)DNA序列在染色體或DNA纖維切片上的定性、定位、相對(duì)定量分析.FISH具有安全、快速、靈敏度高、探針能長(zhǎng)期保存、能同時(shí)顯示多種顏色等優(yōu)點(diǎn),不但能顯示中期分裂相,還能顯示于間期核.同時(shí)在熒光原位雜交基礎(chǔ)上又發(fā)展了多彩色熒光原位雜交技術(shù)和染色質(zhì)纖維熒光原位雜交技術(shù).生物領(lǐng)域應(yīng)用原位雜交技術(shù)的例子:
物種進(jìn)化與系統(tǒng)發(fā)生學(xué)研究:在物種進(jìn)化與系統(tǒng)發(fā)生學(xué)研究中,原位雜交技術(shù)可以用于檢測(cè)物種之間的親緣關(guān)系和進(jìn)化歷程。例如,可以比較不同物種之間特定基因序列的差異,進(jìn)而研究它們的親緣關(guān)系和進(jìn)化歷程。
原位雜交技術(shù)在基因表達(dá)和調(diào)控、細(xì)胞分化與發(fā)育、研究和物種進(jìn)化與系統(tǒng)發(fā)生學(xué)等領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用價(jià)值,為深入探究生命現(xiàn)象、促進(jìn)生物技術(shù)的發(fā)展提供了有力的技術(shù)支持。
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