將32 P標(biāo)記的雙鏈DNA探針于100℃加熱5分鐘，迅速置于冰浴中。單鏈探針不必變性。將探針加到雜交袋中雜交過夜。雜交期間，盛濾膜的容器應(yīng)蓋嚴(yán)，以防液體蒸發(fā)。

雜交結(jié)束后，染色體原位雜交，去除雜交液，立即于室溫把濾膜放入大體積（300-500ml）的2×SSC和0.1% SDS溶液中，輕輕振搖5分鐘，并將濾膜至少翻轉(zhuǎn)一次。重復(fù)洗 一次，同時(shí)應(yīng)避免膜干涸。

68℃用300-500ml 1×SSC和0.1% SDS溶液洗膜兩次，每次1-1.5小時(shí)。此時(shí)已可進(jìn)行自顯影。如背景很高或?qū)嶒?yàn)要求嚴(yán)格的洗膜條件，可用300-500ml 0.2×SSC和0.1% SDS的溶液于68℃將濾膜浸泡60分鐘。

這一原理對于檢測一個(gè)特異的mRNA在某一種生物體，或者某些組織切片、單個(gè)細(xì)胞里具體表達(dá)位置非常有用。該技術(shù)早應(yīng)用于60年代末期，由于核酸分子雜交的特異性高，并可定位，因此該技術(shù)已被廣泛應(yīng)用，例如與細(xì)胞內(nèi)RNA進(jìn)行雜交以觀察該組織細(xì)胞中特定基因表達(dá)水平。原位雜交能在成分復(fù)雜的組織中進(jìn)行單一細(xì)胞的研究而不受同一組織中其他成分的影響，因此對于那些細(xì)胞數(shù)量少且散在于其他組織中的細(xì)胞內(nèi)DNA或RNA研究更為方便；同時(shí)由于原位雜交不需要從組織中提取核酸，對于組織中含量極低的靶序列有極高的敏感性，并可完整地保持組織與細(xì)胞的形態(tài)，更能準(zhǔn)確地反映出組織細(xì)胞的相互關(guān)系及功能狀態(tài)。

①細(xì)胞特異性mRNA轉(zhuǎn)錄的定位，可用于基因圖譜，基因表達(dá)和基因組進(jìn)化的研究；②組織中病毒DNA/RNA的檢測和定位，如EB病毒mRNA、人類狀瘤病毒和巨細(xì)胞病毒DNA的檢測；③癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)及其變化的檢測；④基因在染色體上的定位；⑤檢測染色體的變化，如染色體數(shù)量異常和染色體易位等；⑥分裂間期細(xì)胞遺傳學(xué)的研究，如遺傳病的產(chǎn)前診斷和某些遺傳病基因攜帶者的確定，某些的診斷和生物學(xué)劑量測定等。

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