原位雜交第三天
1) 用1ml含10%熱滅清的MABT溶液置換溶液,放置搖床上25分鐘,然后用1mlMABT置換,湖北原位雜交,25分鐘,再用1mlMABT溶液置換,一小時(shí)以上,后用1mlMABT溶液置換,25分鐘。
2) 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次,每次放置五分鐘。
3)將胚胎轉(zhuǎn)入十六孔板中,吸去staining buffer,加上300ul BM Purple AP Substrate(底物,用之前加5mM左旋米唑),十六孔板外面包上錫箔紙以避光,避免搖動(dòng),室溫下顯色。
4)每隔一小時(shí)觀察胚胎是否開始顯色
5)將顯色完全的胚胎中的底物吸出,植物染色體原位雜交,用PBST洗兩三次后加上4%多聚甲醛固定,拍照。
6)4C冰箱保存。
原位雜交技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域
原位雜交技術(shù)在醫(yī)學(xué)、農(nóng)業(yè)和工業(yè)等領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用。在醫(yī)學(xué)方面,原位雜交技術(shù)可用于檢測(cè)癌細(xì)胞、病毒和細(xì)菌等致病微生物,幫助醫(yī)生制定的診斷和方案。在農(nóng)業(yè)方面,熒光原位雜交,原位雜交技術(shù)可用于基因定位、品種鑒定和遺傳育種等領(lǐng)域,提高農(nóng)作物的產(chǎn)量和品質(zhì)。在工業(yè)方面,原位雜交技術(shù)可用于檢測(cè)基因工程產(chǎn)品中的外源DNA,保證產(chǎn)品的安全性和穩(wěn)定性。
植物染色體原位雜交是一種重要的分子生物學(xué)技術(shù),它可以用來研究植物基因組的結(jié)構(gòu)和功能。該技術(shù)利用DNA探針與目標(biāo)DNA序列的互補(bǔ)性結(jié)合,GISH,通過熒光或性標(biāo)記來檢測(cè)目標(biāo)DNA序列在染色體上的位置和數(shù)量。
植物染色體原位雜交技術(shù)的基本原理是將DNA探針標(biāo)記上熒光或性同位素,然后將其與目標(biāo)DNA序列進(jìn)行雜交。在雜交過程中,探針與目標(biāo)DNA序列互補(bǔ)結(jié)合,形成穩(wěn)定的雙鏈DNA分子。隨后,通過熒光或性同位素探測(cè)技術(shù),可以檢測(cè)到目標(biāo)DNA序列在染色體上的位置和數(shù)量。
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