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主營(yíng)：原位雜交,亞細(xì)胞定位,蛋白互作,啟動(dòng)子篩選
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植物組織原位雜交是一種重要的分子生物學(xué)技術(shù)，它可以用來研究植物基因的表達(dá)和調(diào)控。該技術(shù)利用DNA探針與目標(biāo)組織中的RNA或DNA結(jié)合，從而確定目標(biāo)基因的表達(dá)模式和位置。本文將介紹植物組織原位雜交的原理、步驟和應(yīng)用。
原理
植物組織原位雜交的原理是利用DNA探針與目標(biāo)組織中的RNA或DNA結(jié)合，從而確定目標(biāo)基因的表達(dá)模式和位置。DNA探針是一段已知序列的DNA分子，可以與目標(biāo)RNA或DNA的互補(bǔ)序列結(jié)合。在組織原位雜交中，DNA探針通常標(biāo)記有熒光染料或性同位素，以便于檢測(cè)。
原位雜交技術(shù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果
原位雜交技術(shù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果包括陽(yáng)性信號(hào)和陰性信號(hào)的判斷標(biāo)準(zhǔn)。陽(yáng)性信號(hào)是指探針與目標(biāo)核酸序列特異性結(jié)合形成的雙鏈復(fù)合物，染色體原位雜交，在顯色反應(yīng)、熒光染色或性同位素標(biāo)記下呈現(xiàn)出明顯的信號(hào)。陰性信號(hào)是指探針未與目標(biāo)核酸序列結(jié)合，不呈現(xiàn)任何信號(hào)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析需要結(jié)合探針的特異性和敏感性、組織或細(xì)胞的原始結(jié)構(gòu)以及實(shí)驗(yàn)條件等因素綜合進(jìn)行。
預(yù)雜交
1）每個(gè)管中置換成大約300ulHYB－溶液，60℃水浴5分鐘，避免振蕩。
2）用等體積的HYB＋取代HYB－。
3）60℃水浴，預(yù)雜交4小時(shí)以上。
雜交
1）吸去預(yù)雜交的HYB＋，加上100ul已加入探針的HYB＋溶液（探針濃度約為1ng/ul）..
2）60℃ 溫浴過夜。
注：雜交與預(yù)雜交的溫度可以是55到60度不等，溫度越低，探針結(jié)合越好，溫度越高，背景越小。
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第2年
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