內(nèi)質(zhì)網(wǎng)
內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是細(xì)胞中的一個(gè)復(fù)雜網(wǎng)絡(luò),它負(fù)責(zé)合成和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白質(zhì)。為了定位內(nèi)質(zhì)網(wǎng),F(xiàn)ISH,我們可以使用一種名為GFP-HDEL的蛋白質(zhì)來標(biāo)記它們。GFP-HDEL是一種帶有綠色熒光的蛋白質(zhì),它可以與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的HDEL序列結(jié)合。在洋蔥細(xì)胞中,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通常位于細(xì)胞的中央或周圍。
高爾基體
高爾基體是細(xì)胞中的另一個(gè)復(fù)雜網(wǎng)絡(luò),它負(fù)責(zé)合成和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白質(zhì)。為了定位高爾基體,我們可以使用一種名為FM4-64的化合物來標(biāo)記它們。FM4-64可以穿過細(xì)胞膜并進(jìn)入高爾基體,從而發(fā)出紅色熒光。在洋蔥細(xì)胞中高爾基體通常位于細(xì)胞的中央或周圍。
用水稻原生質(zhì)體進(jìn)行亞細(xì)胞定位時(shí),為什么不拍攝葉綠體的自發(fā)熒光?
經(jīng)測驗(yàn),使用水稻黃化苗制備原生質(zhì)體,載體轉(zhuǎn)化效率及基因表達(dá)強(qiáng)度較高,而黃化苗中葉綠體較少,因此水稻原生質(zhì)體定位拍照時(shí),除非與葉綠體共定位,否則不拍攝葉綠體的自發(fā)熒光。
為什么要提供GFP空載的對照圖片?
(1)作為整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中的操作參照,可排除因?qū)嶒?yàn)操作而導(dǎo)致目的基因沒有熒光信號(hào)的影響。
(2)作為載體體系的參照,確認(rèn)構(gòu)建載體時(shí)所使用的載體是可正常表達(dá)熒光蛋白的。
亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)分離定位法
通過離心等技術(shù)分離各亞細(xì)胞結(jié)構(gòu),然后從分離物種進(jìn)一步提取蛋白質(zhì),對目標(biāo)蛋白質(zhì)進(jìn)行分析或檢測,從而獲得目標(biāo)蛋白的定位。本方法適合研究某蛋白質(zhì)組級別的細(xì)胞器定位,通常與雙向凝膠電泳分離和質(zhì)譜技術(shù)相結(jié)合。
生物信息學(xué)預(yù)測
通過生物信息學(xué)手段,借助一些在線工具對蛋白的亞細(xì)胞定位信息進(jìn)行預(yù)測,這種方法可以在短時(shí)間獲得大量蛋白的預(yù)測信息,不僅輔助于實(shí)驗(yàn),還能省時(shí)省力節(jié)約成本。
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