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主營(yíng)：原位雜交,亞細(xì)胞定位,蛋白互作,啟動(dòng)子篩選
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用水稻原生質(zhì)體進(jìn)行亞細(xì)胞定位時(shí)，為什么不拍攝葉綠體的自發(fā)熒光？
經(jīng)測(cè)驗(yàn)，使用水稻黃化苗制備原生質(zhì)體，載體轉(zhuǎn)化效率及基因表達(dá)強(qiáng)度較高，而黃化苗中葉綠體較少，因此水稻原生質(zhì)體定位拍照時(shí)，除非與葉綠體共定位，否則不拍攝葉綠體的自發(fā)熒光。
為什么要提供GFP空載的對(duì)照?qǐng)D片？
（1）作為整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的操作參照，蛋白互作，可排除因?qū)嶒?yàn)操作而導(dǎo)致目的基因沒(méi)有熒光信號(hào)的影響。
（2）作為載體體系的參照，確認(rèn)構(gòu)建載體時(shí)所使用的載體是可正常表達(dá)熒光蛋白的。
植物的生長(zhǎng)發(fā)育和適應(yīng)環(huán)境變化的能力，很大程度上取決于其基因表達(dá)的模式。這些基因表達(dá)模式是由多種因素調(diào)控的，其中包括被稱為“啟動(dòng)子”的DNA序列。啟動(dòng)子在基因表達(dá)中起著至關(guān)重要的作用，它們能夠識(shí)別和結(jié)合到DNA上，促進(jìn)或抑制特定基因的轉(zhuǎn)錄。因此，篩選和識(shí)別具有特定功能的植物啟動(dòng)子是生物科學(xué)研究的重要任務(wù)之一。
啟動(dòng)子的篩選通常分為兩個(gè)步驟：一是通過(guò)生物信息學(xué)方法在基因組中預(yù)測(cè)可能的啟動(dòng)子序列；二是利用實(shí)驗(yàn)手段對(duì)這些預(yù)測(cè)的啟動(dòng)子進(jìn)行功能驗(yàn)證。
為什么不先對(duì)基因做預(yù)測(cè)，在預(yù)測(cè)的結(jié)果上直接做共定位？
不同的預(yù)測(cè)網(wǎng)站有不同的計(jì)算方法，同一個(gè)基因在不同的預(yù)測(cè)網(wǎng)站也可能得出不同的定位結(jié)果。另外所有的結(jié)果都應(yīng)是基于實(shí)驗(yàn)得到的，對(duì)于不清楚可能定位在哪里的基因，一般推薦先做普通定位，根據(jù)普通定位的結(jié)果再?zèng)Q定做哪種細(xì)胞器的共定位。
適用于什么實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景？
（1）基因功能研究，文章里總少不了這一項(xiàng)。
（2）研究蛋白相互作用，與酵母雙雜實(shí)驗(yàn)結(jié)果相互驗(yàn)證。
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