熒光原位雜交(Fluorescence In Situ Hybridization,FISH)是在性原位雜交技術基礎上發(fā)展起來的一種非性分子生物學和細胞遺傳學結合的新技術,是以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法。
FISH技術具有許多優(yōu)點,如非性、高特異性、高靈敏度、快速簡便、可多重染色等。這些特點使得FISH技術在細胞生物學和臨床醫(yī)學領域得到了廣泛應用,熒光原位雜交,例如用于研究基因表達、基因組變異和染色體異常等。
生物領域應用原位雜交技術的例子:
基因表達和調控研究:原位雜交技術可以用于研究基因表達的調控機制。例如,可以標記特定基因的探針,檢測該基因在不同環(huán)境、不同生長條件下的表達情況,進而研究其表達調控機制。
細胞分化與發(fā)育研究:在細胞分化與發(fā)育研究中,原位雜交技術常被用于檢測和定位特定基因的表達情況,進而了解細胞分化的過程和機制。例如,可以標記與細胞分化相關的基因探針,檢測該基因在不同組織、不同發(fā)育階段的表達情況。
DNA 探針為原位雜交提供較高的靈敏度。與RNA探針相比,DNA探針與靶mRNA 分子的雜交強度較弱,因此在雜交后的洗滌中不應使用甲醛。
探針特異性至關重要。如果已知細胞中mRNA或DNA的確切核苷酸序列,則可據此設計高度的互補探針。如果超過 5% 的堿基對不互補,那么探針只能與靶序列發(fā)生輕度雜交。這意味著,探針更容易在洗滌和檢測步驟中被洗去,可能無法正確檢測。
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