TCEP 溶液,0.5M細(xì)菌的培養(yǎng)和收集:將含有質(zhì)粒pBS的DH5α接種在LB固體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養(yǎng)12-24小時(shí)。用無(wú)菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養(yǎng)約12小時(shí)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)后期。
TCEP 溶液,0.5M質(zhì)粒DNA少量快速提?。嘿|(zhì)粒DNA小量提取法對(duì)于從大量轉(zhuǎn)化子中制備少量部分純化的質(zhì)粒DNA十分有用。這些方法共同特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、快速,能同時(shí)處理大量試樣,所得DNA有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。
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磷酸三(2-氯已基)酯降解菌的降解條件優(yōu)化研究
采用H-1菌株降解有機(jī)磷系阻燃劑磷酸三(2-氯已基)酯(TCEP),通過(guò)單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)對(duì)降解條件進(jìn)行優(yōu)化,得到TCEP的佳生物降解條件:溫度為30℃、p H為7.0、培養(yǎng)時(shí)間為7 d、TCEP初始濃度為20 mg/L,此條件下TCEP的降解率達(dá)到大,還原劑tcep供應(yīng)商,為86.00%。其中,溫度對(duì)TCEP降解的影響zui大,還原劑tcep 溶液,其次是TCEP的初始濃度及p H,還原劑tcep多少錢,培養(yǎng)時(shí)間的影響小。
TCEP 溶液,0.5M(一)、煮沸法1、將1.5ml培養(yǎng)液倒入eppendorf管中,4℃下12000g離心30秒。2、棄上清,將管倒置于衛(wèi)生紙上幾分鐘,肇慶還原劑tcep,使液體流盡。3、將菌體沉淀懸浮于120ml STET溶液中, 渦旋混勻。4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 渦旋振蕩3秒鐘。5、將eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。6、用微量離心機(jī)4℃下12000g離心10分鐘。7、用無(wú)菌牙簽從eppendorf管中去除細(xì)菌碎片。8、取20ml進(jìn)行電泳檢查。
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