原位雜交技術(shù)(in situhybridization)是以標(biāo)記的核酸分子為探針,在組織細(xì)胞原位檢測(cè)特異核酸分子的技術(shù)。使含有特異序列、經(jīng)過標(biāo)記的核酸單鏈即探針,在適宜條件下與組織細(xì)胞中的互補(bǔ)核酸單鏈即靶核酸發(fā)生雜交,再以自顯影或細(xì)胞化學(xué)方法對(duì)標(biāo)記探針進(jìn)行探測(cè),從而在細(xì)胞原位顯示特異的DNA或RNA分子。
可以檢測(cè)cRNA、miRNA、LnRNA、DNA??梢愿鞣N種屬的標(biāo)本,包括哺乳動(dòng)物、爬行動(dòng)物、菌、植物標(biāo)本。也可以檢測(cè)組織芯片。
①細(xì)胞特異性mRNA轉(zhuǎn)錄的定位,植物原位雜交,可用于基因圖譜,熒光原位雜交,基因表達(dá)和基因組進(jìn)化的研究;②組織中病毒DNA/RNA的檢測(cè)和定位,如EB病毒mRNA、人類狀瘤病毒和巨細(xì)胞病毒DNA的檢測(cè);③癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)及其變化的檢測(cè);④基因在染色體上的定位;⑤檢測(cè)染色體的變化,原位雜交,如染色體數(shù)量異常和染色體易位等;⑥分裂間期細(xì)胞遺傳學(xué)的研究,如遺傳病的產(chǎn)前診斷和某些遺傳病基因攜帶者的確定,某些的診斷和生物學(xué)劑量測(cè)定等。同一樣本可以多次做原位雜交實(shí)驗(yàn)嗎?
一般情況下,如果操作沒有得到理想的結(jié)果,是可以將探針洗滌然后進(jìn)行再次的雜交的。如果使用的是直標(biāo)型探針,原位雜交檢測(cè),還可以使用不同探針對(duì)同一樣本進(jìn)行反復(fù)雜交。針對(duì)不同的樣本,處理方法略有不同。
原位雜交實(shí)操中哪些因素比較重要?
重要的因素:溫度、光照、濕度和試劑的PH值。溫度和濕度直接影響著探針和目標(biāo)DNA的雜交效率;光照影響著熒光染料的強(qiáng)度,所以探針要避光保存,其已經(jīng)雜交的片子可用防熒光淬火劑封片且避光保存;各種試劑pH也要達(dá)到要求,這也直接關(guān)系到原位雜交的穩(wěn)定性。
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