植物原位雜交在遺傳育種方面的應(yīng)用主要包括:
檢測物種或品種特異性:通過植物原位雜交技術(shù)可以檢測出不同物種或品種之間基因表達的差異,從而為物種或品種特異性研究提供依據(jù)。
遺傳育種:通過植物原位雜交技術(shù)可以檢測到不同品種之間基因表達的差異,從而為遺傳育種提供重要的參考信息。例如,通過將特定的外源基因?qū)氲街参锛毎?,然后利用原位雜交技術(shù)檢測該基因在植物細胞中的位置和表達情況,為遺傳育種提供重要的參考信息。
以菌落原位雜交為例:對分散在若干個瓊脂平板上的少數(shù)菌落(100-200)進行篩選時,可采用該方法。將這些菌落歸并到一個瓊脂主平板以及已置于第二個瓊脂平板表面的一張纖維素濾膜上。經(jīng)培養(yǎng)一段時間后,對菌落進行原位裂解。主平板應(yīng)貯存于4℃直至得到篩選結(jié)果。
將少數(shù)菌落轉(zhuǎn)移到纖維素濾膜上
(1) 在含有選擇性的瓊脂平板上放一張纖維素濾膜。
(2) 用無菌牙簽將各個菌落先轉(zhuǎn)移至濾膜上,再轉(zhuǎn)移至含有選擇性但未放濾膜的瓊脂主平板上。應(yīng)按一定的格子進行劃線接種(或打點)。每菌落應(yīng)分別劃線于兩個平板的相同位置上。后,在濾膜和主平板上同時劃一個含有非重組質(zhì)粒的菌落。
(3) 倒置平板,于37℃培養(yǎng)至劃線的細菌菌落生長到0.5-1.0mm的寬度。
(4) 用已裝防水黑色繪圖墨水的針頭穿透濾膜直至瓊脂,在3個以上的不對稱位置作標(biāo)記。在主平板大致相同的位置上也作上標(biāo)記。
(5) 用Parafilm膜封好主平板,倒置貯放于4℃,直至獲得雜交反應(yīng)的結(jié)果。
(6) 裂解細菌,按本段下面所述方法,使釋放的DNA結(jié)合于纖維素濾膜。
植物原位雜交的應(yīng)用包括:
研究基因表達:通過觀察熒光信號的位置和數(shù)量,可以確定目標(biāo)基因在植物組織中的表達模式和位置。
染色體定位:將目標(biāo)基因與染色體中的特定位置進行比較,可以確定目標(biāo)基因在染色體中的位置和分布。
基因:通過原位雜交技術(shù),可以確定目標(biāo)基因的序列和位置,植物組織原位雜交,為基因提供重要的參考信息。
檢測物種或品種特異性:通過原位雜交技術(shù)可以檢測出不同物種或品種之間基因表達的差異,從而為物種或品種特異性研究提供依據(jù)。
遺傳育種:通過原位雜交技術(shù)可以檢測出不同品種之間基因表達的差異,從而為遺傳育種提供重要的參考信息。
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