原位雜交(In situ hybridazation)
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收集斑馬魚的胚胎,在Holfretor水中培養(yǎng),到達(dá)所需要的發(fā)育時期時,用蛋白酶去除卵膜,用4%多聚甲醛固定,在4℃保存,原位雜交,二十四小時后用50%2%多聚甲醛溶液洗,然后換成,在-20C 保存,待用(兩天和兩天以上的胚胎需要用處理,染色體原位雜交,去除色素?;蛘呤褂帽斤畴逑∪芤号囵B(yǎng),可阻斷色素的形成)
核酸原位雜交可根據(jù)其檢測物而分為細(xì)胞內(nèi)原位雜交和組織切片內(nèi)原位雜交;根據(jù)其所用探針及所要檢測核酸的不同又可分為DNA-DNA, RNA-DNA, RNA-RNA雜交。但不論哪種雜交都必須經(jīng)過組織細(xì)胞的固定,預(yù)雜交,雜交,沖等一系列洗步驟及自顯影或酶法顯色以顯示雜交結(jié)果。
我們在這兒介紹的是整胚原位雜交,不同于一般的在載片上對細(xì)胞和組織切片進(jìn)行探針雜交及檢測的原位雜交,
植物原位雜交除了在遺傳育種方面的應(yīng)用,還在其他領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用,原位雜交檢測,包括:
植物基因研究:植物基因是一種利用基因工程技術(shù)來人類遺傳疾病的方法。通過植物原位雜交技術(shù),可以將人類基因?qū)氲街参锛?xì)胞中,并在植物細(xì)胞中表達(dá)出相應(yīng)的蛋白質(zhì),為基因提供重要的物質(zhì)基礎(chǔ)。
植物抗性研究:植物原位雜交技術(shù)可以用于研究植物對環(huán)境脅迫的抗性機(jī)制,植物原位雜交,例如抗旱、抗鹽、抗病等,有助于了解植物在環(huán)境脅迫下的生理和分子響應(yīng)機(jī)制。
植物比較研究:通過植物原位雜交技術(shù)可以比較不同植物之間基因表達(dá)模式的差異,從而為植物分類和進(jìn)化研究提供重要的參考依據(jù)。
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