熒光原位雜交-武漢貝科新肽(圖)

詢(xún)盤(pán)留言 |投訴|申領(lǐng)|刪除 產(chǎn)品編號(hào)：585885450 更新時(shí)間：2024-10-11

武漢貝科新肽科技有限公司

主營(yíng)業(yè)務(wù)：原位雜交,亞細(xì)胞定位,蛋白互作,啟動(dòng)子篩選
公司官網(wǎng)：bkxtbio.com.cn
公司地址：湖北省武漢市洪山區(qū)關(guān)山大道289號(hào)紫菘逸景華庭二期109棟2層2002-3號(hào)

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基因組原位雜交技術(shù)基因組原位雜交(Genome in situ hybridization，GISH)技術(shù)是20世紀(jì)80年代末發(fā)展起來(lái)的一種原位雜交技術(shù)。它主要是利用物種之間DNA同源性的差異，熒光原位雜交，用另一物種的基因組DNA以適當(dāng)?shù)臐舛茸鞣庾瑁诎腥旧w上進(jìn)行原位雜交。GISH技術(shù)初應(yīng)用于動(dòng)物方面的研究(Pinkel et al.，1986)，在植物上早應(yīng)用于小麥和栽培種的鑒定(余舜武等 2001；王文奎等 2000)。

植物組織原位雜交的步驟包括以下幾個(gè)方面：

1. 制備組織樣品：從植物中取出需要研究的組織樣品，如根、莖、葉等。

2. 固定組織樣品：將組織樣品固定在載玻片上，通常使用或乙醇等化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行固定。

3. 處理組織樣品：對(duì)固定的組織樣品進(jìn)行脫水、透明化、脫脂等處理，以便于DNA探針的穿透和結(jié)合。

4. 制備DNA探針：根據(jù)需要研究的基因序列，設(shè)計(jì)并合成DNA探針。DNA探針可以標(biāo)記熒光染料或性同位素，以便于檢測(cè)。

5. 雜交DNA探針：將DNA探針與組織樣品進(jìn)行雜交，通常需要在高溫下進(jìn)行，以便于DNA探針與RNA或DNA結(jié)合。

6. 檢測(cè)雜交信號(hào)：通過(guò)熒光顯微鏡或計(jì)數(shù)器等設(shè)備，檢測(cè)DNA探針與RNA或DNA的結(jié)合情況，確定目標(biāo)基因的表達(dá)模式和位置。

以菌落原位雜交為例：對(duì)分散在若干個(gè)瓊脂平板上的少數(shù)菌落（100-200）進(jìn)行篩選時(shí)，可采用該方法。將這些菌落歸并到一個(gè)瓊脂主平板以及已置于第二個(gè)瓊脂平板表面的一張纖維素濾膜上。經(jīng)培養(yǎng)一段時(shí)間后，對(duì)菌落進(jìn)行原位裂解。主平板應(yīng)貯存于4℃直至得到篩選結(jié)果。

將少數(shù)菌落轉(zhuǎn)移到纖維素濾膜上

（1）在含有選擇性的瓊脂平板上放一張纖維素濾膜。

（2）用無(wú)菌牙簽將各個(gè)菌落先轉(zhuǎn)移至濾膜上，再轉(zhuǎn)移至含有選擇性但未放濾膜的瓊脂主平板上。應(yīng)按一定的格子進(jìn)行劃線接種（或打點(diǎn)）。每菌落應(yīng)分別劃線于兩個(gè)平板的相同位置上。后，在濾膜和主平板上同時(shí)劃一個(gè)含有非重組質(zhì)粒的菌落。

（3）倒置平板，于37℃培養(yǎng)至劃線的細(xì)菌菌落生長(zhǎng)到0.5-1.0mm的寬度。

（4）用已裝防水黑色繪圖墨水的針頭穿透濾膜直至瓊脂，在3個(gè)以上的不對(duì)稱(chēng)位置作標(biāo)記。在主平板大致相同的位置上也作上標(biāo)記。

（5）用Parafilm膜封好主平板，倒置貯放于4℃，直至獲得雜交反應(yīng)的結(jié)果。

（6）裂解細(xì)菌，按本段下面所述方法，使釋放的DNA結(jié)合于纖維素濾膜。

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