染色體原位雜交-原位雜交-武漢貝科新肽公司

詢盤留言 |投訴|申領(lǐng)|刪除 產(chǎn)品編號：586126232 更新時間：2024-10-16

武漢貝科新肽科技有限公司

主營業(yè)務(wù)：原位雜交,亞細(xì)胞定位,蛋白互作,啟動子篩選
公司官網(wǎng)：bkxtbio.com.cn
公司地址：湖北省武漢市洪山區(qū)關(guān)山大道289號紫菘逸景華庭二期109棟2層2002-3號

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產(chǎn)品詳情
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供貨總量 : 不限
價格說明 : 議定
包裝說明 : 不限
物流說明 : 貨運及物流
交貨說明 : 按訂單

菌落的裂解及DNA結(jié)合于纖維素濾膜

（1）在一張保鮮膜上制作一個裝有0.5mol/L NaOH的小洼（0.75ml），使菌落面朝上，原位雜交檢測，將濾膜放到小洼上，展平保鮮膜，使濾膜均勻濕潤，讓濾膜留于原處2-3分鐘。

（2）用干紙巾從濾膜的下方吸干濾膜，原位雜交，用一張新的保鮮膜和新配制的0.5mol/L NaOH重復(fù)步驟（1）。

（3）吸干濾膜，染色體原位雜交，將濾膜轉(zhuǎn)移到新的帶有1mol/L Tris·Cl(pH7.4）的保鮮膜洼上。5分鐘后吸干濾膜，再重復(fù)一次該步驟。

（4）吸干濾膜，把它轉(zhuǎn)移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4）的保鮮膜小洼上5分鐘后吸干濾膜，轉(zhuǎn)移到一張干的濾紙上，置于室溫20-30分鐘，熒光原位雜交，使濾膜干燥。

（5）將濾膜夾在兩張干的濾紙之間，在真空烤箱中于80℃干烤2小時，固定DNA。

（6）將固定在膜上的DNA與32 P標(biāo)記的RNA進(jìn)行雜交。

原位雜交技術(shù)的原理是什么？有何用途

原位雜交技術(shù)的原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基序列，將有性或非性的外源核酸(即探針)與組織、細(xì)胞或染色體上待測DNA或RNA互補配對，結(jié)合成專一的核酸雜交分子，經(jīng)一定的檢測手段將待測核酸在組織、細(xì)胞或染色體上的位置顯示出來。為顯示特定的核酸序列要具備3個重要條件：組織、細(xì)胞或染色體的固定、具有能與特定片段互補的核苷酸序列(即探針)、有與探針結(jié)合的標(biāo)記物(曾呈奎等2000)。

預(yù)雜交

1）每個管中置換成大約300ulHYB－溶液，60℃水浴5分鐘，避免振蕩。

2）用等體積的HYB＋取代HYB－。

3）60℃水浴，預(yù)雜交4小時以上。

雜交

1）吸去預(yù)雜交的HYB＋，加上100ul已加入探針的HYB＋溶液（探針濃度約為1ng/ul）..

2）60℃ 溫浴過夜。

注：雜交與預(yù)雜交的溫度可以是55到60度不等，溫度越低，探針結(jié)合越好，溫度越高，背景越小。

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