原位雜交:
原位雜交是指用特定探針定位、檢測DNA、RNA的一種有效的實驗方法,熒光原位雜交,通過把特點序列客隆到特殊載體上,通過轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)一條天然的RNA探針,將探針和切片樣品進(jìn)行雜交,通過一系列顯色方法,來確定RNA或者DNA表達(dá)區(qū)域;本中心原位雜交探針采用的是第高辛和生物素標(biāo)記,靈敏度和同位素相當(dāng)。 我們采用roche標(biāo)記及顯色試劑盒,GISH/ISH/FISH按照探針進(jìn)行收費(fèi),每個試劑盒每條探針可以雜交60-80張玻片,收費(fèi)為1萬5千元,GISH雜交因需要加抗淬滅劑每條探針收費(fèi)為1萬9千元。量大優(yōu)惠!
雜交 (1) 盛有2×SSC的塑料盤同,將干烤的濾膜飄浮在液面上,浸濕5分鐘。(2) 將濾膜轉(zhuǎn)到200ml預(yù)洗液的玻璃皿中。濾膜何疊在一起,放于溶液中。用保鮮膜蓋住玻璃皿,植物原位雜交,放到位于培養(yǎng)箱內(nèi)的旋轉(zhuǎn)平臺上。于50℃處理30分鐘。在這一步及以后的所有步驟中,應(yīng)緩緩搖動濾膜,原位雜交,防止它們粘在一起。(3) 用泡過預(yù)洗液的吸水棉紙輕輕地從膜表面拭去細(xì)菌碎片,染色體原位雜交,以降低雜交背景而不影響陽性雜交信號的強(qiáng)度和清晰度。(4) 將濾膜轉(zhuǎn)到盛有150ml預(yù)雜交液的玻璃中,在適宜溫度(即在水溶液中雜交時用68℃,而在50%甲酰胺中雜交時用42℃)下,預(yù)雜交1-2小時。原位雜交技術(shù)的技術(shù)流程
原位雜交技術(shù)的技術(shù)流程包括樣本處理、探針制備、雜交反應(yīng)和信號檢測等步驟。樣本處理包括組織或細(xì)胞的固定、包埋、切片和脫氧核糖核酸酶消化等步驟,目的是保持組織或細(xì)胞的原始結(jié)構(gòu)和核酸序列的完整性。探針制備包括標(biāo)記探針、純化和變性等步驟,目的是提高探針的特異性和敏感性。雜交反應(yīng)包括預(yù)雜交、雜交和洗脫等步驟,目的是使探針與目標(biāo)核酸序列形成雙鏈復(fù)合物。信號檢測包括顯色反應(yīng)、熒光染色和性同位素標(biāo)記等步驟,目的是可視化目標(biāo)核酸序列的分布。
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