染色體原位雜交-貝科新肽(在線咨詢)-原位雜交

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武漢貝科新肽科技有限公司

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RNA原位核酸雜交又稱RNA原位雜交組織化學(xué)或RNA原位雜交。該技術(shù)是指運用cRNA或寡核苷酸等探針檢測細(xì)胞和組織內(nèi)RNA表達(dá)的一種原位雜交技術(shù)。其基本原理是：在細(xì)胞或組織結(jié)構(gòu)保持不變的條件下，用標(biāo)記的已知的RNA核苷酸片段，按核酸雜交中堿基配對原則，與待測細(xì)胞或組織中相應(yīng)的基因片段相結(jié)合(雜交)，所形成的雜交體(Hybrids)經(jīng)顯色反應(yīng)后在光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡下觀察其細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的mRNA、rRNA和tRNA分子。RNA原位雜交技術(shù)經(jīng)不斷改進(jìn)，其應(yīng)用的領(lǐng)域已遠(yuǎn)超出DNA原位雜交技術(shù)。尤其在基因分析和診斷方面能作定性、定位和定量分析，已成為有效的分子病理學(xué)技術(shù)，同時在分析低豐度和罕見的mRNA表達(dá)方面已展示了分子生物學(xué)的一重要方向。

在原位雜交過程中，需要使用標(biāo)記的核酸探針，通常是在性核素或非性物質(zhì)中標(biāo)記的。這些探針可以通過不同的方式制備，例如從已知序列的DNA或RNA制備，原位雜交，或者通過使用生物信息學(xué)方法設(shè)計和合成新的探針。

在進(jìn)行原位雜交時，細(xì)胞或組織需要固定在適當(dāng)?shù)闹С治锷希巛d玻片。然后，探針與細(xì)胞或組織中的DNA或RNA進(jìn)行雜交，通常是在加熱條件下進(jìn)行的。接下來，通過洗滌和顯影步驟去除未結(jié)合的探針和信號增強(qiáng)劑，后用顯微鏡觀察雜交信號的位置。

FISH技術(shù)的基本步驟包括探針制備、樣品預(yù)處理、探針與樣品的雜交、信號檢測和圖像分析等。在探針制備過程中，使用熒光標(biāo)記物代替同位素標(biāo)記物來標(biāo)記探針。在樣品預(yù)處理過程中，染色體原位雜交，細(xì)胞或組織的固定、裂解和去除非特異性蛋白質(zhì)等操作都是必要的，以提高探針與目標(biāo)序列的親和力和特異性。在探針與樣品的雜交過程中，探針與樣品中的目標(biāo)序列進(jìn)行互補(bǔ)性雜交，形成可檢測的熒光信號。在信號檢測和圖像分析過程中，使用高靈敏度熒光顯微鏡檢測熒光信號并獲取高分辨率的細(xì)胞圖像。

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