原位雜交-武漢貝科新肽-熒光原位雜交

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武漢貝科新肽科技有限公司

主營業(yè)務(wù)：原位雜交,亞細(xì)胞定位,蛋白互作,啟動子篩選
公司官網(wǎng)：bkxtbio.com.cn
公司地址：湖北省武漢市洪山區(qū)關(guān)山大道289號紫菘逸景華庭二期109棟2層2002-3號

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將32 P標(biāo)記的雙鏈DNA探針于100℃加熱5分鐘，迅速置于冰浴中。單鏈探針不必變性。將探針加到雜交袋中雜交過夜。雜交期間，盛濾膜的容器應(yīng)蓋嚴(yán)，以防液體蒸發(fā)。

雜交結(jié)束后，去除雜交液，熒光原位雜交，立即于室溫把濾膜放入大體積（300-500ml）的2×SSC和0.1% SDS溶液中，輕輕振搖5分鐘，并將濾膜至少翻轉(zhuǎn)一次。重復(fù)洗一次，同時(shí)應(yīng)避免膜干涸。

68℃用300-500ml 1×SSC和0.1% SDS溶液洗膜兩次，每次1-1.5小時(shí)。此時(shí)已可進(jìn)行自顯影。如背景很高或?qū)嶒?yàn)要求嚴(yán)格的洗膜條件，可用300-500ml 0.2×SSC和0.1% SDS的溶液于68℃將濾膜浸泡60分鐘。

原位雜交技術(shù)(In situ hybridization，染色體原位雜交，ISH)是分子生物學(xué)、組織化學(xué)及細(xì)胞學(xué)相結(jié)合而產(chǎn)生的一門新興技術(shù)，原位雜交檢測，始于20世紀(jì)60年代。1969年美國耶魯大學(xué)的Gall等(1969)首先用爪蟾核糖體基因探針與其卵母細(xì)胞雜交，將該基因進(jìn)行定位，與此同時(shí)Buongiorno—Nardelli和Amaldi等(1970)相繼利用同位素標(biāo)記核酸探針進(jìn)行了細(xì)胞或組織的基因定位，原位雜交，從而創(chuàng)造了原位雜交技術(shù)。自此以后，由于分子生物學(xué)技術(shù)的迅猛發(fā)展，特別是20世紀(jì)70年代末到80年代初，分子、質(zhì)粒和噬菌體DNA的構(gòu)建成功，為原位雜交技術(shù)的發(fā)展奠定了深厚的技術(shù)基礎(chǔ)。

而是對完整的斑馬魚胚胎進(jìn)行探針雜交及檢測，從整體上把握探針的結(jié)合部位，然后對胚胎進(jìn)行切片，以確定探針結(jié)合的具體位置。整胚原位雜交在斑馬魚分子生物學(xué)研究中是一種非常重要的實(shí)驗(yàn)方法，原位雜交的探針可以是同位素的探針，用自顯影來檢測；也可以是非同位素的探針，通過熒光或酶法予以檢測。我們這兒所介紹的一種原位雜交的方法是通過后者，以標(biāo)記探針，然后用酶聯(lián)的方法進(jìn)行檢測。

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