原位雜交(In situ hybridazation)
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收集斑馬魚的胚胎,在Holfretor水中培養(yǎng),到達(dá)所需要的發(fā)育時(shí)期時(shí),用蛋白酶去除卵膜,用4%多聚甲醛固定,在4℃保存,原位雜交,二十四小時(shí)后用50%2%多聚甲醛溶液洗,染色體熒光原位雜交,然后換成,在-20C 保存,待用(兩天和兩天以上的胚胎需要用處理,去除色素?;蛘呤褂帽斤畴逑∪芤号囵B(yǎng),可阻斷色素的形成)
原位雜交技術(shù)(in situhybridization)是以標(biāo)記的核酸分子為探針,在組織細(xì)胞原位檢測(cè)特異核酸分子的技術(shù)。使含有特異序列、經(jīng)過標(biāo)記的核酸單鏈即探針,在適宜條件下與組織細(xì)胞中的互補(bǔ)核酸單鏈即靶核酸發(fā)生雜交,再以自顯影或細(xì)胞化學(xué)方法對(duì)標(biāo)記探針進(jìn)行探測(cè),從而在細(xì)胞原位顯示特異的DNA或RNA分子。
可以檢測(cè)cRNA、miRNA、LnRNA、DNA。可以各種種屬的標(biāo)本,包括哺乳動(dòng)物、爬行動(dòng)物、菌、植物標(biāo)本。也可以檢測(cè)組織芯片。
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