原位雜交第二天
1.
1)將探針回收,放于-20C保存(通常探針可重復使用十次左右)。
2)加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升,60℃,原位雜交技術(shù),放置30分鐘,重復一次。
3)置換2XSSCT1ml,60℃,放置15分鐘。
4)置換0.2XSSCT1ml,原位雜交,60℃,原位雜交試劑,放置30分鐘,重復一次。
2.
1)用MABT洗兩次,每次五分鐘,放在搖床輕輕搖動。
2)室溫下加1ml 1:2:7溶液,時間為一小時。
3)按1:3000的比例在1:2:7溶液中加入酶連,4C 冰箱過夜。
根據(jù)核酸探針標記物的種類分別進行自顯影或利用酶檢測系統(tǒng)進行不同顯色處理。細胞或組織的原位雜交切片在顯示后均可進行半定量的測定,如自顯影可利用人工或計算機輔助的圖象分析檢測儀(computer-assisted image analysis)檢測銀粒的數(shù)量和分布的差異。非性核酸探針雜交的細胞或組織可利用酶檢測系統(tǒng)顯色,然后利用顯微分光光度計或圖像分析儀對不同類型和數(shù)量的核酸的顯色強度進行檢測。植物原位雜交除了在遺傳育種方面的應(yīng)用,還在其他領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用,包括:
植物基因研究:植物基因是一種利用基因工程技術(shù)來人類遺傳疾病的方法。通過植物原位雜交技術(shù),可以將人類基因?qū)氲街参锛毎校⒃谥参锛毎斜磉_出相應(yīng)的蛋白質(zhì),為基因提供重要的物質(zhì)基礎(chǔ)。
植物抗性研究:植物原位雜交技術(shù)可以用于研究植物對環(huán)境脅迫的抗性機制,植物染色體原位雜交,例如抗旱、抗鹽、抗病等,有助于了解植物在環(huán)境脅迫下的生理和分子響應(yīng)機制。
植物比較研究:通過植物原位雜交技術(shù)可以比較不同植物之間基因表達模式的差異,從而為植物分類和進化研究提供重要的參考依據(jù)。
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