湖北熒光原位雜交-貝科新肽

詢盤留言 |投訴|申領(lǐng)|刪除 產(chǎn)品編號：587527923 更新時間：2024-11-17

武漢貝科新肽科技有限公司

主營業(yè)務：原位雜交,亞細胞定位,蛋白互作,啟動子篩選
公司官網(wǎng)：bkxtbio.com.cn
公司地址：湖北省武漢市洪山區(qū)關(guān)山大道289號紫菘逸景華庭二期109棟2層2002-3號

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一. 原位雜交天

1. 重新水化和固定

1）吸取固定好的胚胎，熒光原位雜交，加入50%的PBST溶液，放置5分鐘。

2）置換成30％的PBST溶液，放置5分鐘

3）置換成PBST溶液，放置5分鐘，重復一次

4）置換成4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘

5）用PBST洗兩次，每次放置五分鐘，室溫。

蛋白酶處理與后固定（本實驗不做此步）

1）用10ul/ml的蛋白酶K在室溫下處理胚胎。5體節(jié)以下的胚胎不處理，5體節(jié)到24小時的胚胎處理3分鐘，24小時以上的胚胎處理5分鐘或者更長。發(fā)育時間越短的胚胎越嫩，可以不用或者少用蛋白酶處理，發(fā)育時間長的胚胎就需要用蛋白酶來疏松組織，以便于雜交。

2）用PBST溶液輕洗，在PBST中放置5分鐘。

3）用4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘，室溫。

4）用PBST洗兩次，每次放置五分鐘，室溫。

基因組原位雜交技術(shù)基因組原位雜交(Genome in situ hybridization，GISH)技術(shù)是20世紀80年代末發(fā)展起來的一種原位雜交技術(shù)。它主要是利用物種之間DNA同源性的差異，用另一物種的基因組DNA以適當?shù)臐舛茸鞣庾?，在靶染色體上進行原位雜交。GISH技術(shù)初應用于動物方面的研究(Pinkel et al.，1986)，在植物上早應用于小麥和栽培種的鑒定(余舜武等 2001；王文奎等 2000)。

組織原位雜交(Tissue in situ hybridization），即原位雜交組織化學技術(shù)和原位雜交細胞化學技術(shù)

原位雜交技術(shù)的基本原理

利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵的形成，出現(xiàn)穩(wěn)定的雙鏈區(qū)，形成雜交的雙鏈。

1.兩條核苷酸單鏈片段，在適宜的條件下，通過氫鍵結(jié)合，形成DNA-DNA、DNA一RNA或RNA一RNA雙鍵分子

2.應用帶有標記的（有性同位素，如3H、35S、32P，熒光素、生物素、等非性物質(zhì))DNA或RNA片段作為核酸探針，與組織切片或細胞內(nèi)待測核酸(RNA或DNA）片段進行雜交

3.用自顯影等方法予以顯示，在光鏡或電鏡下觀察目的mRNA或DNA的存在與定位

用原位雜交術(shù)，可在原位研究細胞合成某種多肽或蛋白質(zhì)的基因表達。

此方法有很高的敏感性和特異性，可進一步從分子水來探討細胞的功能表達及其調(diào)節(jié)機制。已成為當今細胞生物學、分子生物學研究的重要手段。

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