武漢貝科新肽公司-動物組織原位雜交

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武漢貝科新肽科技有限公司

主營業(yè)務(wù)：原位雜交,亞細胞定位,蛋白互作,啟動子篩選
公司官網(wǎng)：bkxtbio.com.cn
公司地址：湖北省武漢市洪山區(qū)關(guān)山大道289號紫菘逸景華庭二期109棟2層2002-3號

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原位雜交（In situ hybridazation）

固定

收集斑馬魚的胚胎，在Holfretor水中培養(yǎng)，到達所需要的發(fā)育時期時，用蛋白酶去除卵膜，用4%多聚甲醛固定，動物組織原位雜交，在4℃保存，二十四小時后用50%2%多聚甲醛溶液洗，然后換成，在-20C 保存，待用(兩天和兩天以上的胚胎需要用處理，去除色素?；蛘呤褂帽斤畴逑∪芤号囵B(yǎng)，可阻斷色素的形成)

和其它實驗方法一樣，必須同時設(shè)對照試驗以證明其實驗結(jié)果特異性。對照試驗的設(shè)置須根據(jù)核酸探針和靶核苷酸的種類和現(xiàn)有的可能條件去選定。ISHH的優(yōu)點是它的高度特異性，它可測定組織、培養(yǎng)的單個細胞或細胞提取物中的核苷酸含量。應(yīng)用高敏感度的性標(biāo)記cRNA探針在理想的ISHH的實驗條件下檢測mRNA，其敏感度可達到20個mRNA拷貝/每個細胞。由于雙鏈DNA的穩(wěn)定性，在用ISHH定位DNA時很少發(fā)生丟失，降解，其敏感性高到能夠顯示在染色體鋪片上，有時甚至在組織切片上的單個基因拷貝。正因為如此，對ISHH結(jié)果的解釋應(yīng)持慎重態(tài)度，特別是前人未報告過的新發(fā)現(xiàn)。

熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH）是在20世紀80年代末在性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種非性分子細胞遺傳技術(shù)，以熒光標(biāo)記取代同位素標(biāo)記而形成的一種新的原位雜交方法，探針首先與某種介導(dǎo)分子（reporter molecule）結(jié)合，雜交后再通過細胞化學(xué)過程連接上熒光染料.FISH的基本原理是將DNA（或RNA）探針用特殊的核苷酸分子標(biāo)記，然后將探針直接雜交到染色體或DNA纖維切片上，再用與熒光素分子偶聯(lián)的單與探針分子特異性結(jié)合來檢測DNA序列在染色體或DNA纖維切片上的定性、定位、相對定量分析.FISH具有安全、快速、靈敏度高、探針能長期保存、能同時顯示多種顏色等優(yōu)點，不但能顯示中期分裂相，還能顯示于間期核.同時在熒光原位雜交基礎(chǔ)上又發(fā)展了多彩色熒光原位雜交技術(shù)和染色質(zhì)纖維熒光原位雜交技術(shù).

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