原位雜交技術(shù)的定義和基本原理原位雜交技術(shù)是一種基于核酸分子雜交原理,將標(biāo)記的核酸探針與生物組織或細(xì)胞中的DNA或RNA進(jìn)行特異性結(jié)合,GISH,從而在細(xì)胞水平上檢測(cè)目標(biāo)核酸序列分布的技術(shù)。原位雜交技術(shù)的基本原理是利用DNA或RNA的互補(bǔ)性,湖北原位雜交,通過加熱或化學(xué)反應(yīng)使探針與組織或細(xì)胞中的目標(biāo)核酸序列形成雙鏈復(fù)合物,進(jìn)而實(shí)現(xiàn)目標(biāo)核酸序列的定位。
怎樣保證原位雜交實(shí)驗(yàn)操作時(shí)的溫度?
建議儀器操作,熒光原位雜交,人工操作的話要注意:
(1)對(duì)熒光原位雜交操作過程中可能使用的一些儀器進(jìn)行溫控檢查,不符合要求的進(jìn)行更換。
(2)盡可能地保持環(huán)境溫度在20度以上。
(3)針對(duì)需要預(yù)熱以達(dá)到要求溫度的試劑,在使用前必須使用溫度計(jì)對(duì)其進(jìn)行測(cè)溫。
(4)同時(shí)檢測(cè)的樣本不超過4塊,原位雜交檢測(cè),操作一定要迅速,實(shí)驗(yàn)人員要注意一些小部件的溫度,尤其是在冬季。
原位雜交技術(shù)(in situhybridization)是以標(biāo)記的核酸分子為探針,在組織細(xì)胞原位檢測(cè)特異核酸分子的技術(shù)。使含有特異序列、經(jīng)過標(biāo)記的核酸單鏈即探針,在適宜條件下與組織細(xì)胞中的互補(bǔ)核酸單鏈即靶核酸發(fā)生雜交,再以自顯影或細(xì)胞化學(xué)方法對(duì)標(biāo)記探針進(jìn)行探測(cè),從而在細(xì)胞原位顯示特異的DNA或RNA分子。
可以檢測(cè)cRNA、miRNA、LnRNA、DNA。可以各種種屬的標(biāo)本,包括哺乳動(dòng)物、爬行動(dòng)物、菌、植物標(biāo)本。也可以檢測(cè)組織芯片。
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