雙分子熒光互補技術-武漢貝科新肽科技公司

詢盤留言 |投訴|申領|刪除 產(chǎn)品編號：589037017 更新時間：2024-12-22

武漢貝科新肽科技有限公司

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洋蔥亞細胞定位如何定位重要細胞器亞細胞定位辦法就是用來肯定細胞內(nèi)分子在細胞中的位置的一種辦法。如何使用熒光顯微鏡技術來定位洋蔥細胞中的一些重要細胞器。

植物細胞是由許多不同的細胞器組成的，這些細胞器在細胞內(nèi)扮演著不同的角色。為了研究這些細胞器的功能和位置，科學家們使用各種技術來對它們進行定位。其中一種常用的技術是熒光顯微鏡技術，它可以通過標記特定的蛋白質(zhì)或化合物來觀察它們在細胞內(nèi)的位置。

什么是亞細胞定位？首先我們來看什么是亞細胞。細胞是構成生物體的基本結構單位和功能單位，是生命的物質(zhì)基礎。細胞的結構復雜精巧且高度有序，亞細胞是比細胞結構更細化的結構，根據(jù)功能和空間分布的不同，細胞內(nèi)部可以進一步劃分為不同的細胞區(qū)域或細胞器，雙分子熒光互補技術，即亞細胞，其結構一般只有在電子顯微鏡(EMs)下才能看到。它們的特點是在細胞內(nèi)，功能和空間相互隔離，又共同協(xié)調(diào)維持完整的細胞功能。在一定范圍內(nèi)，亞細胞結構等同于細胞器，不過像細胞膜雖然可以叫亞細胞結構，但不是細胞器。每種亞細胞結構中都存在一組特定的蛋白質(zhì)，亞細胞結構為這些蛋白質(zhì)行使功能提供了相對獨立的生命活動場所。同時也只有在相同或相近的亞細胞位置上蛋白質(zhì)間才會有相互作用。

亞細胞定位操作步驟

1、通過一些在線網(wǎng)站預測亞細胞定位

2、亞細胞定位載體構建

（1）引物設計：利用引物設計軟件，根據(jù)pEGP-MCS-N1或pEGP-C1-MCS的酶切位點設計目的基因引物。

（2）載體構建：將PCR產(chǎn)物酶切后插入pEGP-MCS-N1或pEF-C1-MCS，得到表達目的基因與EGP融合蛋白質(zhì)的真核表達載體。

3、細胞轉染

當細胞生長到對數(shù)生長期時，接種到共聚焦顯微鏡的玻璃底培養(yǎng)皿（35mm petri dish，10 mm Microwell）中，培養(yǎng)過夜。當細胞貼壁率達到30%~50%時，將融合綠色熒光蛋白GFP的重組載體質(zhì)粒和目標細胞器質(zhì)粒共轉染細胞。37℃孵箱培養(yǎng)24~72h。

4、激光掃描共聚焦顯微鏡觀察

將上述細胞分別在24、36、48、72h的時間點，根據(jù)實驗需求選擇對應激發(fā)波長（常用405nm、488nm和561nm），使用共聚焦顯微鏡觀察，采取圖像。

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