染色體原位雜交-武漢貝科新肽公司

詢盤留言 |投訴|申領(lǐng)|刪除 產(chǎn)品編號：590206644 更新時間：2025-01-11

武漢貝科新肽科技有限公司

主營業(yè)務(wù)：原位雜交,亞細胞定位,蛋白互作,啟動子篩選
公司官網(wǎng)：bkxtbio.com.cn
公司地址：湖北省武漢市洪山區(qū)關(guān)山大道289號紫菘逸景華庭二期109棟2層2002-3號

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多彩色熒光原位雜交技術(shù)多彩色熒光原位雜交(Multicolor fluorescence in situ hybridization，mFISH)是在熒光原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新技術(shù)，染色體原位雜交，它用幾種不同顏色的熒光素單獨或混合標記的探針進行原位雜交，能同時檢測多個靶位，各靶位在熒光顯微鏡下和照片上的顏色不同，呈現(xiàn)多種色彩，因而被稱為多彩色熒光原位雜交。它克服了FISH技術(shù)的局限，能同時檢測多個基因，在檢測遺傳物質(zhì)的突變和染色體上基因定位等方面得到了廣泛的應(yīng)用

以菌落原位雜交為例：對分散在若干個瓊脂平板上的少數(shù)菌落（100-200）進行篩選時，可采用該方法。將這些菌落歸并到一個瓊脂主平板以及已置于第二個瓊脂平板表面的一張纖維素濾膜上。經(jīng)培養(yǎng)一段時間后，對菌落進行原位裂解。主平板應(yīng)貯存于4℃直至得到篩選結(jié)果。

將少數(shù)菌落轉(zhuǎn)移到纖維素濾膜上

（1）在含有選擇性的瓊脂平板上放一張纖維素濾膜。

（2）用無菌牙簽將各個菌落先轉(zhuǎn)移至濾膜上，再轉(zhuǎn)移至含有選擇性但未放濾膜的瓊脂主平板上。應(yīng)按一定的格子進行劃線接種（或打點）。每菌落應(yīng)分別劃線于兩個平板的相同位置上。后，在濾膜和主平板上同時劃一個含有非重組質(zhì)粒的菌落。

（3）倒置平板，于37℃培養(yǎng)至劃線的細菌菌落生長到0.5-1.0mm的寬度。

（4）用已裝防水黑色繪圖墨水的針頭穿透濾膜直至瓊脂，在3個以上的不對稱位置作標記。在主平板大致相同的位置上也作上標記。

（5）用Parafilm膜封好主平板，倒置貯放于4℃，直至獲得雜交反應(yīng)的結(jié)果。

（6）裂解細菌，按本段下面所述方法，使釋放的DNA結(jié)合于纖維素濾膜。

FISH是原位雜交技術(shù)大家族中的一員，因其所用探針被熒光物質(zhì)標記（間接或直接）而得名，該方法在80年代末被發(fā)明，現(xiàn)已從實驗室逐步進入臨床診斷領(lǐng)域。基本原理是熒光標記的核酸探針在變性后與已變性的靶核酸在退火溫度下復(fù)性；通過熒光顯微鏡觀察熒光信號可在不改變被分析對象（即維持其原位）的前提下對靶核酸進行分析。DNA熒光標記探針是其中常用的一類核酸探針。利用此探針可對組織、細胞或染色體中的DNA進行染色體及基因水平的分析。熒光標記探針不對環(huán)境構(gòu)成污染，靈敏度能得到保障，可進行多色觀察分析，因而可同時使用多個探針，縮短因單個探針分開使用導(dǎo)致的周期過程和技術(shù)障礙。

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